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一、湿热灭菌法（最常用） 原理：利用高温高压蒸汽的穿透力和热效应，使微生物蛋白质变性、酶失活，从而达到灭菌目的。
适用场景：适用于大多数发酵罐（如机械搅拌通风发酵罐、气升式发酵罐）及液体培养基的灭菌。
操作步骤： - 空罐灭菌（CIP清洗后）
- 关闭所有阀门，向发酵罐内通入蒸汽，使罐内温度升至 121-130℃，压力维持在 0.1-0.15 MPa。
- 保持该条件 20-30分钟，确保罐体、管道、搅拌器等部件彻底灭菌。
- 灭菌后，通过排汽阀缓慢释放压力，避免罐内负压损坏设备。
- 实罐灭菌（培养基灭菌）
- 进料：将配制好的培养基泵入发酵罐，注意避免泡沫产生。
- 升温：开启蒸汽阀门，使培养基温度升至 121℃，压力 0.1 MPa 左右。
- 保温：维持温度 121℃ 和压力 0.1 MPa 持续 20-30分钟（具体时间根据培养基体积和成分调整）。
- 降温：灭菌结束后，通过夹套通入冷却水或循环冷却液，快速降温至发酵所需温度（如30-37℃）。
- 排汽：降温过程中需间歇排汽，防止罐内形成负压，同时避免蒸汽冷凝水稀释培养基。
优点：灭菌彻底、成本低、操作简便。
缺点：高温可能破坏培养基中热敏性成分（如维生素、氨基酸），需通过补料或优化配方解决。 二、干热灭菌法原理：利用高温干燥空气的氧化作用，使微生物脱水、蛋白质变性。
适用场景：适用于发酵罐内耐高温但不宜用湿热灭菌的部件（如玻璃器皿、金属工具）。
操作步骤： - 将待灭菌物品放入干热灭菌箱，设置温度 160-180℃，维持 2-3小时。
- 灭菌后，待箱内温度降至 60℃ 以下再打开箱门，避免物品骤冷破裂。
优点：对热敏性物质破坏小，适用于干燥物品。
缺点：灭菌时间长、能耗高，不适用于液体培养基或大型发酵罐。 三、过滤除菌法原理：通过微孔滤膜（如0.22μm）截留微生物，实现无菌过滤。
适用场景：适用于热敏性培养基成分（如血清、酶制剂）或空气的灭菌。
操作步骤： - 液体过滤：将培养基通过无菌滤膜（如聚醚砜膜）过滤至已灭菌的发酵罐中。
- 空气过滤：在发酵罐进气口安装无菌空气过滤器（如烧结金属滤芯），过滤压缩空气中的微生物。
优点：避免高温破坏热敏性成分，适用于特定场景。
缺点：滤膜可能堵塞，需定期更换；无法杀灭滤膜表面的微生物，需配合其他灭菌方法使用。
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发表于 2025-7-24 08:38:27
