固相多肽合成仪使用方法

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　　PurePep® Sonata® +固相多肽合成仪使用方法如下：
　　一、固相多肽合成仪操作前准备
　　1.安装与校准：
　　选择干燥、清洁、温度和湿度适宜的场所安装仪器，确保安装位置平稳，避免运行时晃动。
　　核对电源规格，确保电压和频率与仪器要求匹配。
　　仪器首次使用或长时间未使用后重新启用时，需进行校准，特别是实时流量监测技术相关组件，以保障液体传输的精确性。
　　2.材料准备：
　　根据目标多肽序列和性质，选择合适的树脂（如Rink Amide树脂、Wang树脂等）和保护基（如Fmoc保护基、侧链保护基等）。
　　准备合成所需的氨基酸、活化试剂、溶剂等，确保所有材料新鲜且纯净，避免杂质引入。
　　提前配置好裂解液等试剂，并妥善保存。
　　3.软件设置：
　　打开PurePep Sonata+软件，该软件设计符合21 CFR Part 11要求，具备用户管理、电子签名、审计追踪等功能。
　　根据实验需求，选择预设的标准实验方案作为模板，或自定义设置合成方法。可以轻松导入序列以避免错误，并设置合成规模、反应温度、反应时间等参数。
　　软件允许在当前合成运行的同时编程新的合成任务，提高生产效率。
　　二、合成操作
　　1.树脂处理：
　　将树脂加入固相合成仪的反应釜中，用适当的溶剂（如DCM）溶胀树脂，然后抽干。
　　使用DMF等溶剂洗涤树脂，以去除杂质，洗涤结束后抽干备用。
　　2.缩合反应：
　　将第一个氨基酸（通常从C端开始）用一定体积的DMF溶解，并加入缩合剂（如HCTU、DIC/Oxyma等）进行活化。
　　将活化后的氨基酸溶液投入固相合成仪中，补充DMF至适当反应浓度。
　　启动合成程序，开始缩合反应。反应过程中，仪器会自动监测反应温度、压力等参数，确保合成过程的控制和安全。
　　PurePep Sonata+具有多种混合模式，包括氮气鼓泡、变速振荡和再循环三种混匀方式，可单独使用或组合使用，以最大限度提高反应效率。
　　3.脱除保护基：
　　缩合反应结束后，抽干溶剂。
　　使用适当的碱性溶液（如PIP/DMF溶液）脱除氨基酸N端的保护基（如Fmoc基团）。
　　再次抽干溶剂并用DMF洗涤树脂，准备加入下一个氨基酸。
　　4.重复缩合循环：
　　按照树脂上预设的氨基酸序列，依次重复上述“脱保护→洗涤→活化氨基酸→投料→缩合→洗涤”的步骤，进行缩合循环操作，直至完成所有氨基酸的连接。
　　三、合成后处理
　　1.树脂裂解：
　　合成结束后，用适当的溶剂（如IPA和DCM）交叉洗涤树脂，完成树脂的收缩。
　　将肽树脂加入反应釜中，加入预冷的裂解液（通常包含TFA等强酸），搅拌反应以将多肽从树脂上裂解下来。
　　裂解结束后放出反应液，抽滤除去树脂并以TFA等溶剂洗涤。
　　2.多肽纯化：
　　将裂解液转入旋转蒸发仪中室温浓缩至小体积。
　　使用适当的沉淀剂（如甲基叔丁基醚）使多肽析出，并通过离心、洗涤等步骤得到粗肽。
　　使用高效液相色谱（HPLC）等方法对粗肽进行纯化，以去除杂质并分离出目标多肽。
　　3.浓缩、过滤与冻干：
　　将纯化后的多肽溶液旋蒸除去有机溶剂，得到浓缩的多肽溶液。
　　对浓缩后的多肽溶液进行无菌过滤。
　　将过滤后的多肽溶液置于冻干机中，设定适当的升温程序进行冻干处理。
　　四、固相多肽合成仪使用注意事项
　　1.安全防护：
　　在操作过程中，应佩戴防护手套、护目镜等个人防护装备，以防接触合成过程中的化学试剂。
　　2.异常处理：
　　密切关注合成仪的显示屏和报警系统，及时发现并处理任何异常情况。
　　当仪器出现故障或异常时，不要试图自行拆解修理，应及时联系售后人员。
　　3.清洁与维护：
　　合成结束后，及时清理仪器内部和外部，包括反应釜、管道、进样和反应容器等，防止残留试剂腐蚀仪器或残留样品影响下次合成。
　　定期对仪器进行全面维护保养，如更换磨损部件、校准传感器等，确保仪器始终保持良好运行状态。
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