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氨基色谱柱（NH₂柱）是一种常用的正相色谱柱，其固定相为氨基键合硅胶，适用于分离糖类、脂肪酸、醇类等极性化合物。新柱或长期未使用的色谱柱在使用前需进行活化处理，以去除残留杂质、恢复柱效并延长使用寿命。以下是氨基色谱柱的活化方法及注意事项： 一、活化目的- 去除残留溶剂：消除生产或储存过程中残留的有机溶剂（如甲醇、乙腈）。
- 平衡固定相：使固定相表面充分润湿，形成稳定的分离层。
- 提高柱效：恢复色谱柱的分离性能，确保峰形对称、保留时间稳定。
二、活化步骤1. 流动相准备- 正相体系（常用）：
- 初始流动相：正己烷-异丙醇（90:10，v/v）或纯正己烷（根据柱子说明书调整）。
- 梯度活化：若柱子说明书推荐梯度活化，可按以下比例逐步过渡：
- 阶段1：正己烷-异丙醇（95:5，v/v）
- 阶段2：正己烷-异丙醇（90:10，v/v）
- 阶段3：正己烷-异丙醇（85:15，v/v）
- 每个阶段运行10-20倍柱体积（CV），流速0.5-1.0 mL/min。
- 反相体系（少数情况）：
- 若柱子设计为反相模式（如C18改性氨基柱），需用甲醇-水（80:20，v/v）或纯甲醇活化。
2. 连接色谱柱- 将色谱柱按流动相流向（通常箭头标识）正确安装到液相色谱系统中。
- 确保系统管路、过滤器、进样阀等部件清洁，避免二次污染。
3. 冲洗色谱柱- 低流速启动：以0.1-0.2 mL/min的流速缓慢注入流动相，避免压力突变损坏柱床。
- 逐步提高流速：待压力稳定后，将流速升至0.5-1.0 mL/min（根据柱子规格调整）。
- 持续冲洗：
- 正相体系：冲洗20-50倍柱体积（CV），直至基线平稳。
- 反相体系：冲洗10-20倍柱体积（CV）。
4. 平衡色谱柱- 活化完成后，用分析用流动相（如正己烷-异丙醇-乙酸，90:9:1，v/v/v）平衡色谱柱10-20倍柱体积，确保分离条件稳定。
三、注意事项- 避免压力冲击：
- 活化时流速需从低到高逐步调整，防止柱床塌陷或固定相脱落。
- 关闭泵或更换流动相时，应先降流速至零，再操作。
- 防止柱子干燥：
- 活化过程中及完成后，色谱柱需始终保持润湿状态。若需暂停使用，应用活化溶剂充满柱子并密封两端。
- 兼容性检查：
- 确保活化溶剂与分析方法兼容。例如，若后续分析使用含水的流动相，活化后需用无水溶剂过渡，避免固定相水解。
- 温度控制：
- 正相色谱柱通常在室温下活化，避免高温（>40℃）导致固定相变性。
- 特殊柱子处理：
- 若柱子说明书推荐特定活化程序（如使用极性溶剂预处理），需严格遵循。例如，某些氨基柱需先用二氯甲烷冲洗以去除残留硅醇基。
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发表于 2025-9-1 17:25:13
发表于 2025-9-2 10:44:42
