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BLT小课堂 | 萤火虫萤光素酶在ATP检测中的应用

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       ATP结构图
  发光反应的方程式:


  研究历史: 1885年萤光素及萤光素酶次被Dubois提取出来;1952年Strehler和Totter使用萤光素酶粗制品测定ATP;1961年White等人工合成了萤光素;1985年Dewet, JR等克隆了P. Pyralis萤光素酶基因并在大肠杆菌中表达,从中得到具有活性的萤光素酶,从而开启了萤光素酶作为报告基因的历程。 ATP的含量直接反应了细胞或微生物的含量,通过监测ATP含量的改变,可以评价多种药物、生物制剂或生物活性物质引起的细胞杀伤、细胞抑制和细胞增殖作用;另外ATP也常作为微生物污染的一个指标,检测ATP含量能直接反映出其受污染程度。测定生物体中ATP的水平及其动态变化便成为监测生物体的手段。接下来,小编将向大家具体介绍一下他在近年来的应用领域。
  01 食品安的身体健康、生命安全长期受到微生物污染的威胁,营养琼脂平板计数法是国际上针对微生物检测的现有标准方法,然而该方法要求在 37 ℃下持续培养 48 h,过于繁琐的操作无法实现快速检测。现下,国内也加大了对核酸法、电阻抗测量、免疫学方法、微菌落技术等各类微生物快速检测技术展开了研究、应用。ATP生物发光法因快速、简便且具有较高灵敏度的缘故,可用于实时监控微生物污染,与食品行业需求相符合,故而有关该技术的研究与应用十分广泛。 其检测步骤通常为: ①首先根据ATP发光检测试剂盒的使用说明将标准ATP按梯度稀释,与酶、底物、缓冲液按比例混合,使用发光检测设备(比如博鹭腾发光检测系列)测量对应的发光值,绘制标准曲线。 ②提取样品细胞中的ATP,稀释,之后按比例与酶、底物、缓冲液混合,使用发光检测设备测定发光值,代入标准曲线,即可知道样品中ATP浓度。(ATP浓度与细胞浓度关系的测定:取对数生长期的细胞,离心浓缩后用苔盼蓝染色,计活细胞数,之后在 96孔培养板上等比稀释,测定其发光值,发光值代入标准曲线获得ATP浓度,经过计算即可获得ATP浓度与细胞浓度关系。)
  应用案例:
  对应文献: [1]周旻.ATP生物发光法检测卵巢癌细胞对药物的敏感性[J].广东医学,2000,21(4):293-295. [2]陈历排.用微量板 ATP生物发光法检测肿瘤细胞对药物的敏感性[J].肿瘤,2000,20(2):103-105. [3]刘君.三磷酸腺苷发光法快速检测结核分枝杆菌耐药的研究[J].现代预防医学,2014,41(1):108-113. [4]梁镇兴.利用自主发光结核分枝杆菌快速连续检测抗结核药物的细胞内活性[J].实用医学杂志,2013,29(23):3823-3826. [5]张志敏.ATP释放法测定人外周血NK细胞活性及初步临床应用[J].免疫学杂志,1992,8(4):260-261. [6]湛学军.三磷酸腺苷生物发光法分析等中药抑制肝、胃癌细胞增殖活性的研究[J].江西医药,2005,40(11):706-708. [7]朱云仙.养心2号方对慢性心力衰竭大鼠心肌组织ATP及MMP的影响[J].南京中医药大学学报,2016,32(3):274-278. [8]彭艳.艾灸对脾虚大鼠空肠组织ATP含量和ATP酶活性的影响[J].中国现代医学杂志,2013,23(1):8-13.


  高灵敏度板式发光检测仪Lux-P110:目前已被多家学校、医院、企业所使用,具有的灵敏度(≤10amolATP或≤20zmol 萤光素酶)、超宽的线性范围(≥6个数量级),同时配备了两个原位进样器,支持双萤光素酶报告体系的检测。


  高灵敏度管式发光检测仪Lux-T020:管式发光检测仪主要针对单样品发光检测的客户,相比于Lux-P110,体积更加小巧,使用更加方便,灵敏度则与Lux-110相同。该系列设备支持试用,欢迎您与我们联系。

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发表于 7 小时前 | 显示全部楼层
谢谢楼主,非常感谢
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