蛋白质纯化系统的工作原理与操作指南

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蛋白质纯化系统通过多步骤分离技术，从复杂生物样品中提取目标蛋白质。其核心原理基于蛋白质的物理化学特性差异，如分子大小、电荷性质、疏水性及特异性结合能力，通过层析柱、过滤装置和检测系统实现高效分离与纯化。

​​工作原理​​
系统主要采用层析技术，包括凝胶过滤（分子筛）、离子交换、亲和层析等。样品经预处理后进入层析柱，不同蛋白质因特性差异在固定相与流动相间分配系数不同，从而分步洗脱。检测器实时监测流出液，通过紫外吸收或荧光信号确认目标蛋白峰位，收集纯化组分。

​​操作指南​​

​​样品准备​​：离心去除细胞碎片，调整缓冲液pH及离子强度以匹配层析条件。
​​系统平衡​​：用起始缓冲液冲洗层析柱及管路，确保基线稳定。
​​上样与洗脱​​：控制流速将样品注入柱内，依次采用不同梯度缓冲液（如盐浓度递增或pH变化）分离目标蛋白。
​​检测与收集​​：监测信号峰形，手动或自动收集目标蛋白峰对应馏分。
​​纯度验证​​：通过SDS-PAGE电泳或质谱分析确认纯度，透析去除残留盐分。
操作中需严格控制温度与流速，避免蛋白变性；定期维护系统管路与层析柱，防止堵塞或交叉污染。该系统适用于重组蛋白、天然产物等的分离，是生物制药与基础研究的核心工具。