实时荧光PCR试剂盒的组成
实时荧光PCR试剂盒通常包含以下关键组分:
1、PCR反应混合液:包括DNA聚合酶(如Taq酶)、dNTPs(脱氧核苷三磷酸)、缓冲液等,提供PCR扩增所需的基本反应环境。
2、荧光探针或染料:
[*]TaqMan探针:基于荧光共振能量转移(FRET)原理,探针5'端标记荧光报告基团(如FAM),3'端标记淬灭基团(如TAMRA)。
[*]SYBRGreen染料:非特异性结合双链DNA,发出荧光信号,适用于快速筛查但可能产生假阳性。
3、引物对:特异性引物,用于扩增目标DNA或RNA片段。
4、阳性/阴性对照:用于验证实验的准确性和排除污染。
5、逆转录酶(RT-qPCR试剂盒):用于RNA病毒的检测,先将RNA逆转录为cDNA再进行PCR扩增。
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